细胞凋亡检测试剂盒

转化医学时代下的细胞凋亡检测技术与产品指南

一、检测原理与主流技术概述

随着转化医学的飞速发展，细胞凋亡检测技术日新月异。其中，Annexin V/PI 双染法和 TUNEL 法成为当前主流的细胞凋亡检测手段。

1. Annexin V/PI 双染法

原理：Annexin V特异性结合凋亡早期暴露于细胞膜外侧的磷脂酰丝氨酸（PS），通过荧光标记后，结合流式细胞术进行检测。PI染料可穿透破损细胞膜与DNA结合，用于区分晚期凋亡及坏死细胞^[1][6]^。

优势：此方法的灵敏度高，能在短短的40分钟内完成检测，特别适用于区分不同凋亡阶段的细胞研究^[1][4]^。

荧光选择：常用 FITC 标记 Annexin V，需注意避免与细胞自发荧光重叠，红色荧光标记时需考虑仪器兼容性^[1][6]^。

2. TUNEL 法

原理：通过标记 DNA 断裂的 3'-OH 末端来检测晚期凋亡，需借助荧光显微镜或流式细胞仪进行分析^[6][8]^。

操作步骤：包括固定、透膜、标记（TdT酶催化荧光探针连接）及DAPI复染核等步骤^[7][8]^。

适用性：适用于组织切片、贴壁/悬浮细胞的研究，具有较高的灵敏度，但在成本上相对较高^[8]^。

二、试剂盒选择指南一览

在选择细胞凋亡检测试剂盒时，需要根据实验目的、样本类型、仪器条件等因素进行综合考虑。以下是两种主流检测技术的简要对比：

| 参数 | Annexin V/PI | TUNEL |

| | | |

| 检测阶段 | 早期至晚期凋亡 | 中晚期凋亡（DNA断裂） |

| 样本类型 | 细胞悬液 | 细胞、组织切片 |

| 仪器要求 | 流式细胞仪 | 荧光显微镜/流式细胞仪 |

| 操作复杂度 | 简单快速（无需透膜） | 复杂（需固定、透膜） |

| 成本 | 较低 | 较高（酶反应体系） |

若追求快速区分凋亡阶段，推荐选用 Annexin V/PI 方法^[1][6]^；若聚焦于 DNA断裂的研究或需要组织样本兼容性，则选择 TUNEL 方法更为合适^[6][8]^。

三、操作注意事项详解

在实际操作过程中，需要注意以下事项以确保实验的准确性：

对于 Annexin V/PI 检测，需避免反复冻存 Annexin V，PI染色前需洗涤以去除游离染料，减少背景干扰^[1][6]^。

对于 TUNEL 检测，透膜时间需优化，避免过度破坏细胞结构；同时建议使用含血清的封闭液，以降低非特异性结合的风险^[7][8]^。

四、推荐产品与配套试剂介绍

市场上有多款优质的细胞凋亡检测试剂盒供研究者选择。以下推荐两款主流产品及其配套试剂：

1. Annexin V-FITC/PI 试剂盒（Elabscience，货号 E-CK-A211）：具有灵敏度高、支持流式快速检测等特点^[1]^。

2. TUNEL一步法试剂盒（绿色荧光）：适配荧光酶标仪/显微镜，含有预优化的缓冲液，方便研究人员的操作^[8]^。进行细胞凋亡检测时，还需自备一些基本试剂，如 PBS、4%多聚甲醛、去离子水等^[1][8]^。

研究者可根据实验需求、设备条件以及预算等因素，选择最适合的检测技术与产品方案。